Cytometria spektralna
Przepływowa cytometria spektralna, nazywana także cytometrią widmową, to technika wysokoprzepustowa, która w swych założeniach opiera się o zasady cytometrii przepływowej, ale ma unikalne możliwości rejestracji sygnału optycznego w postaci charakterystyk widmowych widm fluorescencyjnych wszystkich występujących w próbce barwników fluorescencyjnych.
Możliwe to jest dzięki zastosowaniu odpowiednich detektorów Dzięki spektralnej cytometrii przepływowej widmo emisyjne każdej cząsteczki fluorescencyjnej jest rejestrowane przez zestaw kilku (6) detektorów w określonym zakresie długości fal. Widmo fluorescencyjne każdej cząsteczki można rozpoznać, zarejestrować jako sygnaturę widmową i wykorzystać jako odniesienie do analiz wielokolorowych.
Nasza pracownia wyposażona jest w cytometr spektralny ID7000 firmy Sony. Cytometr ten jest wyposażony w 4 lasery: 405, 488, 561 oraz 637 nm, oraz system detektorów fluorescencji w zakresach:
- FL1 525/50
- FL2 585/30
- FL3 617/30
- FL4 665/30
- FL5 720/60
- FL6 785/60
co umożliwia równoczesne przeprowadzenie analizy próbek wybarwionych kilkunastoma barwnikami fluorescencyjnymi jednocześnie.
Cytometr spektralny umożliwia analizę markerów powierzchniowych występujących na powierzchni komórek oraz mikropęcherzyków zewnątrzkomórkowych (z ang. Extracellular vesicles - EVs). Nasz zespół specjalizuje się w badaniach na EVs (egzosomy, ektosomy).
Nasz cytometr wyposażony jest w statyw na 24 probówki o wymiarach 12 x 75 mm (5 ml). Najmniejsze obiekty, które mogą być wykrywane w SSC mają średnicę 160 nm. Dodatkowym atutem naszego cytometru jest to, że możemy wykonać analizy z niewielkiej objętość próbki (ok. 100 ul) a szybkość pomiaru wynosi 40.000 zdarzeń na sekundę.
Obraz przedstawia przykładowe widma fluorescencyjne dla próbki egzosomów znakowanych przeciwciałem anty tetraspanina CD63 AF700
